Se sua proteína não for do mesmo tamanho que seu anticorpo, você pode eluir com 0.1M glicina, pH2-3 e então separar a proteína de interesse do anticorpo usando SEC (como superdex 200).
O que é eluir uma proteína?
As proteínas são eluídas por um gradiente de quantidades crescentes de um solvente orgânico, como acetonitrila. As proteínas eluem de acordo com sua hidrofobicidade. Após a purificação por HPLC a proteína fica em uma solução que contém apenas compostos voláteis e pode ser facilmente liofilizada.
Por que as proteínas têm uma eluição de pH baixo?
O uso de tampão de baixo pH para eluição da proteína A é conhecido por contribuir para a agregação do produto No entanto, um conjunto mais limitado de evidências sugere que o baixo pH pode não ser o único causa da agregação na cromatografia de proteína A, em vez disso, outras facetas do processo podem contribuir significativamente.
Como é feita a eluição?
Em química analítica e orgânica, eluição é o processo de extração de um material de outro por lavagem com um solvente; como na lavagem de resinas de troca iônica carregadas para remover íons capturados. … Depois que as moléculas do solvente deslocam o analito, o analito pode ser retirado da coluna para análise.
Quantos anticorpos você precisa para Coip?
Para experimentos de rotina Co-IP, o anticorpo que usei é não mais que 2ug (No meu conjunto, 1,4 -2,0ug de anticorpo é suficiente para capturar 2500-5000ug de lisado de proteína.) Mas ainda depende dos níveis de expressão de suas proteínas alvo em suas amostras, então você provavelmente terá que fazer algumas modificações.
