Para reduzir a ligação não específica de anticorpos e, consequentemente, reduzir o sinal de fundo, recomenda-se usar uma solução de bloqueio antes da incubação com anticorpos A solução de bloqueio mais eficaz será ser aquele contendo soro da mesma espécie em que o anticorpo secundário foi criado.
Como evitar manchas no fundo?
Diminuir a espessura das seções de tecido pode ajudar a reduzir a coloração de fundo. Tente cortar seções mais finas para um IHC mais limpo. Também é importante tomar cuidado para não deixar as seções secarem, pois a secagem pode resultar em manchas não específicas.
Como você otimiza a imunofluorescência?
Microscopia de Imunofluorescência: 10 Dicas Técnicas para o Sucesso
- Fixação e Permeabilização Celular. …
- Especificidade do anticorpo. …
- Usando a diluição de anticorpo apropriada. …
- Otimização de Buffers e Agentes de Bloqueio. …
- Usando uma densidade celular apropriada. …
- Múltipla Coloração. …
- Anticorpos Secundários. …
- Redução de fundo.
O que causa a coloração de fundo?
A coloração de fundo pode ser causada por ligação inadequada de anticorpos ou por erros durante a preparação da lâmina de tecido.
Os anticorpos secundários reduzem os sinais de fundo?
F(ab) anticorpos secundários específicos podem ajudar a reduzir o sinal de fundo eliminando a ligação não específica de as proteínas IgG encontradas nos tecidos pelo anticorpo secundário.
