Índice:
- A seguir está uma visão geral das diferentes etapas de um protocolo de coloração de imunofluorescência indireta
- Como você realiza a imunofluorescência?
- Como você usa imunofluorescência em uma célula?
- O que é um exemplo de imunofluorescência?
- Qual é o uso da coloração por imunofluorescência?
Vídeo: Como fazer imunofluorescência?
2024 Autor: Fiona Howard | [email protected]. Última modificação: 2024-01-10 06:42
A seguir está uma visão geral das diferentes etapas de um protocolo de coloração de imunofluorescência indireta
- Planejamento de experimentos e preparação de amostras. …
- Fixação da amostra. …
- Permeabilização Celular. …
- Bloqueio. …
- Incubação de anticorpos primários. …
- Incubação Secundária de Anticorpos. …
- Contracoloração e Montagem.
Como você realiza a imunofluorescência?
Todas as etapas de incubação ocorrem à temperatura ambiente
- Lave as células duas vezes e use uma pinça para colocar cuidadosamente a lamínula com as células viradas para cima na câmara umidificada.
- Fixar com formol 4% por 10 minutos e lavar 3 ×.
- Permeabilize com 0,1% TX-100/PBS por 15–20 minutos e lave 3 ×.
Como você usa imunofluorescência em uma célula?
Protocolo de imunofluorescência para células aderentes
- Semente 1–1,5 x104 células por poço de uma lâmina de 4 câmaras em 500 mL de meio de cultura. Incubar a 37°C a 5% CO2.
- 32–36 horas após a semeadura das células, remova o meio de cultura de células e lave as células 3 vezes usando 500 µL de 1X PBS.
O que é um exemplo de imunofluorescência?
Por exemplo, um pesquisador pode criar anticorpos primários em uma cabra que reconhecem vários antígenos e, em seguida, empregar anticorpos secundários de coelho acoplados a corantes que reconhecem a região constante do anticorpo de cabra ( anticorpos anti-cabra de coelho).
Qual é o uso da coloração por imunofluorescência?
A coloração por imunofluorescência (IF) é uma técnica amplamente utilizada em pesquisas biológicas e diagnósticos clínicos IF utiliza anticorpos marcados com fluorescência para detectar antígenos alvo específicos. Seguido por imagens, é uma técnica muito direta, pois você pode realmente ver alguma coisa.
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Como reduzir a coloração de fundo em imunofluorescência?
Para reduzir a ligação não específica de anticorpos e, consequentemente, reduzir o sinal de fundo, recomenda-se usar uma solução de bloqueio antes da incubação com anticorpos A solução de bloqueio mais eficaz será ser aquele contendo soro da mesma espécie em que o anticorpo secundário foi criado .
