Vortexar não irá cisalhar seu RNA para torná-lo inutilizável se você estiver fazendo RT de iniciação aleatória - somente se você quiser clonar mRNA longo. O suporte técnico da Invitrogen também está correto. O clorofórmio é mais pesado que o Trizol e afundará no fundo do tubo.
É seguro vortexar o RNA?
Não vortex lisados de Trizol ou amostras de RNA para evitar cisalhamento. Após a extração, mantenha sempre as amostras de RNA no gelo. Este protocolo foi desenvolvido para amostras lisadas com 1mL de Trizol em um tubo de 1,5 ou 2mL.
Você pode aquecer RNA?
Portanto, evite altas temperaturas ( acima de +65°C), pois elas afetam a integridade do RNA. Em vez disso, para derreter estruturas secundárias, aqueça o RNA a +65°C por 15 minutos na presença de tampões desnaturantes.
Como ressuspender os pellets de RNA?
ressuspender o pellet com água morna (40-50 graus celc). incubar em 45 graus celc por 10 minutos. coloque-os em +4 por 4-6 horas.
Como você precipita RNA?
A.
Após a concentração de sal ter sido ajustada, o RNA pode ser precipitado por adicionando 2,5 volumes de etanol ou 1 volume de isopropanol e misturando bem, seguido de resfriamento por pelo menos 15 minutos a -20° C.
