Orientações para descongelar células
- Descongele as células congeladas rapidamente (< 1 minuto) em banho-maria a 37°C.
- Diluir as células descongeladas lentamente antes de incubar, usando meio de crescimento pré-aquecido.
- Plaque as células descongeladas em alta densidade para otimizar a recuperação.
- Sempre use técnica asséptica adequada e trabalhe em uma capela de fluxo laminar.
Por que o descongelamento das células é feito?
É vital descongelar as células corretamente para manter a viabilidade da cultura e permitir que a cultura se recupere mais rapidamente. Alguns crioprotetores, como o DMSO, são tóxicos acima de 4°C. Portanto, é essencial que as culturas sejam descongeladas rapidamente e diluídas em meio de cultura para minimizar os efeitos tóxicos.
Qual é o processo de descongelamento?
Descongelamento é o processo de levar um produto congelado de congelado a uma temperatura (geralmente acima de 0°C) onde não há gelo residual, ou seja, “descongelamento”. O descongelamento é muitas vezes considerado simplesmente como a reversão do processo de congelamento.
Qual é a melhor maneira de congelar células?
Congele as células lentamente reduzindo a temperatura a aproximadamente 1°C por minuto usando um congelador criogênico de taxa controlada ou um recipiente de congelamento criogênico como “Mr. Frosty”, disponível na Thermo Scientific Nalgene labware (Nalge Nunc). Sempre use o meio de congelamento recomendado.
Como você descongela uma célula primária?
Limpe a parte externa do frasco de células com etanol 70% ou isopropanol. Em um gabinete de biossegurança, gire a tampa um quarto de volta para aliviar a pressão interna e depois reaperte. Descongele rapidamente as células em banho-maria a 37°C girando suavemente o frasco. Remova o frasco quando restar uma pequena quantidade de gelo.
