Para poder extrair os pigmentos dos cloroplastos são suspensos em um tampão de isolamento. Para poder extrair os pigmentos dos cloroplastos, primeiro temos que nos livrar do tampão. Qual é a melhor maneira de separar os cloroplastos do tampão? use uma centrífuga para separar o
Como isolar um cloroplasto?
No método de isolamento de cloroplastos, a parede celular é quebrada mecanicamente usando um liquidificador ou homogeneizador. Em seguida, o tecido foliar intacto e os restos celulares são removidos por filtração. Os cloroplastos são coletados por centrifugação usando um gradiente de percoll.
Como você faz um tampão de isolamento de cloroplasto?
Prepare a quantidade necessária de tampão de isolamento de cloroplasto 1X diluindo o estoque de tampão 2X 1:1 com água dH2O Adicione 10 µL da solução de BSA a 10% por mL de Cloroplasto 1X Tampão de Isolamento. Imediatamente antes de usar, adicione 1 µL de DTT por 1 mL de tampão de isolamento de cloroplasto. Rotule este buffer como 'Complete Buffer'.
O que há em um tampão de isolamento de cloroplasto?
tampão de isolamento de DNA consistia em 100 mM NaCl, 100 mM Tris-HCl (pH 8,0), 50 mM EDTA e 1 mM DTT A lise do cloroplasto foi obtida incubando o pellet de cloroplasto com 8 ml de tampão de isolamento de DNA, 1,5 ml de SDS a 20%, 20 µl de 2-Mercaptoetanol e 30 µl de Proteinase K (10 mg/ml) em um tubo de centrífuga a 55°C por 4 h.
Qual é o pH do tampão usado para homogeneizar a folha de espinafre no protocolo de isolamento de cloroplastos?
O espinafre é carregado com bons cloroplastos e eles se isolam facilmente. Você terá que colocar as folhas em um liquidificador frio com 0,1 M de tampão fosfato, pH 7,5 e 0,5 M de sacarose para evitar que estourem.
